Diferencias en la fagocitosis de Mycobacterium habana TMC 5135 en cultivos celulares de macrófagos murinos / Differences in phagocytosis of Mycobacterium ´habana´ TMC 5135 by murine macrophages cellular cultures

La tuberculosis es uno de los mayores problemas que enfrenta la salud mundial en la actualidad. La única vacuna disponible contra esta enfermedad es la BCG, esta protege solo contra la tuberculosis grave de la infancia, lo cual plantea un reto en la búsqueda de nuevos candidatos vacunales. Teniendo en cuenta el antecedente protector de Mycobacterium ´habana´ contra la tuberculosis experimental, nos propusimos aportar elementos que avalen el empleo de M. ´habana´ TMC 5135 como candidato vacunal contra la tuberculosis, mediante estudios de infección en cultivos celulares de macrófagos murinos. Se caracterizó el proceso de fagocitosis de esta micobacteria por cultivos primarios de macrófagos peritoneales murinos y por la línea celular RAW 264.7, para lo cual se determinó el porcentaje de fagocitosis y el número fagocítico. El presente trabajo demostró que el proceso de fagocitosis de M. ´habana´ TMC 5135 está influenciado por la fuente celular empleada como célula hospedadora, así como por la carga bacteriana infectante y el tiempo de exposición a la misma. La presente investigación contribuye a la caracterización de la infección por esta micobacteria en sus principales células blanco de la inmunidad innata y traza el camino de futuras investigaciones para evaluar la activación de mecanismos efectores de la inmunidad innata frente a este candidato(AU)

Tuberculosis remains as a major problem in the global health. BCG is the available vaccine against tuberculosis but only protects against severe form of disease during childhood, so the search for new vaccine candidates is a challenge. Taking into account the protective capacity of Mycobacterium ´habana´ against experimental tuberculosis, we proposed in vitro experiments using murine macrophages (peritoneal macrophages and cell line Raw 264.7) to characterize phagocytic process of this candidate. Phagocitic index and phagocytic number were calculated. The present work demonstrated that the phagocytosis process of M. ‘habana’ TMC 5135 is influenced by the cellular source used as host cell, as well as by the infecting bacterial load and the time of exposure. The present investigation contributes to the characterization of the infection by this mycobacteria in its main target cells of innate immunity and it suggest future investigations to evaluate the activation of effector mechanisms of the innate immunity against this candidate(AU)

Evaluación de la citotoxicidad de extractos marinos sobre un panel de líneas celulares / Evaluation of cytotoxicity of different marine extracts in a cell line panel

Introducción: los extractos naturales provenientes de fuentes marinas representan una importante fuente en el descubrimiento de nuevos compuestos con potencialidades como anticarcinogénicos. Objetivos: determinar el efecto de cinco extractos provenientes de diferentes organismos marinos sobre la viabilidad de un panel de cinco líneas celulares (A549, HEp-2, MDA-MB-231, SiHa y MRC-5). Metodos: el efecto de los extractos (Physalia physali, Cassiopea xamachana, Tripneustes ventricosus, Echinometra lucunter) se determinó mediante el ensayo colorimétrico con el empleo de bromuro de 3(4,5 dimetil-2-tiazoil)-2,5-difeniltetrazolio. Mediante de RT-PCR se determinó adicionalmente el efecto del extracto de Echinometra lucunter sobre la expresión de los genes apoptóticos p53, survivin, bcl-xL y noxa en SiHa. Resultados: todos los extractos afectaron la viabilidad celular de la línea normal MRC-5 de pulmón humano. Sin embargo, no disminuyeron la viabilidad de las líneas celulares de origen tumoral con excepción del extracto de Echinometra lucunter. Este extracto solo afectó la viabilidad de la línea celular tumoral SiHa. Los valores de las concentraciones inhibitorias medias (CI50) mostraron que solo para el extracto de Echinometra lucunter, la línea celular tumoral SiHa evidenció una CI50 de 52,07±11 µg/mL que es significativamente inferior a MRC-5 con una CI50 de 98,6±14 µg/mL, por lo que se muestra selectividad frente a las células tumorales. Adicionalmente, el extracto disminuyó significativamente la expresión de los genes proapoptóticos lo que sugiere la muerte celular por necrosis en las células SiHa. Conclusiones: el extracto proveniente de Echinometra lucunter resultó selectivo frente a las células tumorales SiHa. Experimentos que incluyan otras líneas celulares de cáncer cérvicouterino podrían confirmar el potencial de este extracto frente a esta variedad histológica de cáncer(AU)

Introduction: natural extracts from marine sources represent an important source for the discovery of new compounds with anti-carcinogenic potentialities. Objectives: to determine the effect of five extracts from several marine organisms pm the viability of a panel of five cell lines (A549, HEp-2, MDA-MB-231, SiHa y MRC-5). Methods: the effects of the extracts (Physalia physali, Cassiopea xamachana, Tripneustes ventricosus, Echinometra lucunter) were then determined by using the colorimetric assay with 3 (4,5 dimethyl-2-tiazoil)/2,5-difeniltetrazolium bromide. Additionally, the effect of extract of Echinometra lucunter was determined on the expression of apoptotic genes p53, survivin, bcl-xL and noxa in SiHa. Results: all the extracts affected the cell viability of the normal cell line MRC-5 of the human lung. However, viability of tumoral cell lines did not decrease except for the extract from Echinometra lucunter. This extract just affected the viability of tumor cell line SiHa. The mean inhibitory concentrations (IC50) showed that only for Echinometra lucunter extract, the tumor cell line SiHa revealed a IC50 of 52,07±11 µg/mL that is significantly lower than that of MRC-5 with IC50 of 98,6±14 µg/mL, therefore the selectivity against the tumor cells was shown. Moreover, the extract markedly decreased the expression of propapoptosis genes, thus indicating the cell death from necrosis in SIHa cells. Conclusions: extract from Echinometra lucunter was selective against tumor cells SiHa. Other experiments that will include other cervix uterine cancer cell lines can confirm the potential of this extract to have an effect on this histological cancer type(AU)

Evaluación de diferentes muestras para la detección molecular de Mycobacterium leprae en Cuba / Evaluation of different samples for Mycobacterium leprae molecular detection in Cuba

Introducción: en la actualidad, la principal estrategia para controlar la infección por Mycobacterium leprae es la detección precoz y la multiterapia. El objetivo del presente estudio fue evaluar la utilidad del empleo de diferentes muestras clínicas en el diagnóstico molecular de la infección por M. leprae. Métodos: se evaluaron 22 pacientes con clínica sugestiva de lepra. Se tomaron muestras de linfa de cuatro puntos (ambos lóbulos auriculares y ambos codos) recogidas en una lámina porta objetos (lámina de baciloscopía) y en un hisopo, además muestra de hisopado nasal, muestra de sangre total y de tejido de la lesión. Las muestras se analizaron mediante baciloscopía, histología y PCR según correspondió en cada caso. Por otro lado, para determinar la sensibilidad y especificidad del método, se realizó un estudio de casos y controles en el que se emplearon 40 láminas de baciloscopías negativas de pacientes con lepra paucibacilar y 40 láminas negativas de personas sin lepra. Resultados: el 54,5 por ciento de los pacientes resultó positivo por baciloscopía. Solo en el 41 por ciento de los pacientes la histología tuvo resultados concluyentes de lepra. En el 100 por ciento de los pacientes se detectó la presencia de ADN de M. leprae a partir de la lámina de baciloscopía y el hisopado de linfa. En el 95,45 por ciento de los pacientes se pudo amplificar la secuencia diana a partir de la sangre total y solo en el 31,8 por ciento de los pacientes el hisopado nasal resultó positivo. El estudio de casos y controles mostró que la sensibilidad y especificidad de la PCR respecto al diagnóstico convencional fue de 100 por ciento. Conclusión: el diagnóstico de M. leprae mediante PCR, es de gran utilidad cuando las técnicas convencionales no son concluyentes. La lámina de baciloscopía y el hisopado de linfa constituyen las muestras clínicas más útiles para la confirmación molecular de la infección por M. leprae(AU)

Introduction: Currently, the early detection and treatment with multitherapy are the main strategy to control the infection by Mycobacterium leprae. The objective of the present study was to evaluate the usefulness of different clinical samples for molecular diagnosis of M. leprae infection. Methods: Twenty two patients with suggestive clinical leprosy were analyzed. Different clinical samples were taken by slit skin smear, histopathology and PCR. To determine the sensitivity and specificity of the PCR method, a case-control study was also performed using 40 slides from negative smears of patients with leprosy paucibacillary and 40 from individuals without leprosy. Results: From all patient studied fifty-four percent were positive by slit skin smear and 41 percent were conclusive of leprosy by histopathology. M. leprae DNA was detected in slit skin smears and lymph swabs in 100 percent of patients. In 95,45 percent of patients were detected M. leprae DNA in whole blood and in 31,8 percent of them in nasal swab. The sensitivity of PCR respect to conventional diagnostic was 100 percent, the specificity was 97.5 percent, and the positive predictive value was 97.56 and the negative predictive value was100 percent. Conclusion: The diagnosis of M. leprae by PCR is very useful when conventional techniques are inconclusive. The slit skin smears and lymph swabs are the most useful clinical samples for molecular confirmation of infection with M. leprae(AU)

Citotoxicidad de extractos de plantas medicinales sobre la línea celular de carcinoma de pulmón humano A549 / Cytotoxicity of medicinal plant extracts on the human lung carcinoma cell line A549

Es objetivo del trabajo evaluar el efecto de 10 extractos de plantas medicinales sobre el crecimiento de la línea celular humana de carcinoma de pulmón A549. El efecto de los extractos sobre la células tumorales se midió a través de un ensayo colorimétrico mediante el empleo del bromuro de 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazolio a concentraciones entre 3,9-250 µg/mL durante 72 h y se calculó la concentración citotóxica media para cada uno. Del total de los extractos evaluados solo cuatro (Parthenium hysterophorus, Bixa orellana, Momordica charantia y Cucurbita maxima) evidenciaron concentraciones citotóxicas medias inferiores a 100 µg/mL. Excepto Parthenium hysterophorus, las restantes se emplean en la medicina tradicional para el tratamiento del cáncer. Los extractos de Cecropia peltata, Melia azedarach, Annona glabra, Artemisia absintium, Lepidium virginicum y Bidens pilosa no mostraron efectos citotóxicos significativos. Los extractos de plantas que se emplean en la medicina tradicional para el tratamiento del cáncer, mostraron citotoxicidad sobre las células tumorales. El conocimiento etnobotánico representa una herramienta importante en la selección de plantas medicinales, en la búsqueda de nuevos compuestos para el tratamiento del cáncer

To evaluate the effect of 10 Cuban medicinal plant extracts on the human lung tumor cell line A549. The effect of the plant extracts on tumor cells was determined by a colorimetric assay using the 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) at concentrations ranging from 3,9-250 µg/mL for 72 hours and the mean cytotoxic concentration was calculated for each of them. The ethanolic extracts of Parthenium hysterophorus, Bixa orellana, Momordica charantia and Cucurbita maxima showed mean cytotoxic concentrations under 100 µg/mL. Except for P hysterophorus, the others are used in traditional medicine to fight cancer. The remaining extracts from Cecropia peltata, Melia azedarach, Annona glabra, Artemisia absintium, Lepidium virginicum and Bidens pilosa did not show significant cytotoxic effects. the plant extracts for cancer treatment in traditional medicine showed cytotoxic effect on the tumor cell lines. Ethnobotanical data represent an important tool for medicinal plants screening in the quest for new compounds to treat cancer